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體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗儀

更新時間:2025-04-30   點擊次數(shù):59次

體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗儀

實驗目的:

檢測受試物是否引起哺乳動物骨髓細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

實驗概述:

染色體是細胞核中具有特殊結構和遺傳功能的小體,當化學物質(zhì)作用于細胞周期G1期和S期時誘發(fā)染色體型畸變,而作用于G2期時則誘發(fā)染色單體型畸變。給試驗的大、小鼠腹腔注入秋水仙素抑制細胞分裂時紡錘絲的形成,以增加中期分裂相細胞的比例,并使染色體絲縮短、分散、輪廓清晰。在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。本方法特別適用于需考慮體內(nèi)代謝活化后的染色體畸變分析。若有證據(jù)表明受試物或其代謝產(chǎn)物不能到達骨髓,則不適用于本方法。

應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準:

GB/T 15670.16-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第16部分:體內(nèi)哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗》

試驗流程

1)動物選擇:常用嚙齒類動物(大鼠或小鼠),通常每組至少5/性別。

2)給藥方案:

單次給藥:通常在采樣前12-48小時給藥(覆蓋細胞周期)

多次給藥:若受試物代謝或毒性需重復暴露。

3.陽性對照:已知致畸變劑

4.陰性對照:溶劑對照(如生理鹽水或DMSO

5.采樣時間:通常在給藥后24小時和48小時采集骨髓細胞(覆蓋不同細胞周期階段)

6.染色體制備:

處死動物后取出骨髓細胞。

用秋水仙素(Colchicine)處理,阻斷細胞分裂于中期。低滲處理、固定、制片并染色(如Giemsa染色)

7.鏡檢分析:

觀察至少200個中期分裂相/動物,記錄畸變類型和頻率,

區(qū)分染色體型畸變(如雙著絲粒體)和染色單體型畸變(如斷裂)

結果判定

1)劑量相關性:畸變率隨劑量增加而升高。

2)統(tǒng)計學差異:試驗組畸變率顯著高于陰性對照組(p<0.05)

3)生物學意義:需結合歷史對照數(shù)據(jù)和畸變類型綜合評估。

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